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烟草花叶病毒(TMV)是一种在烟草及蔬菜等经济作物中广泛传播的病毒,对农业生产造成很大的危害.研究者利用植物基因工程的方法将烟草花叶病毒外壳蛋白基因(CP基因)导入烟草并在
更新时间:2024-04-28 05:16:05
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问题描述:

烟草花叶病毒(TMV)是一种在烟草及蔬菜等经济作物中广泛传播的病毒,对农业生产造成很大的危害.研究者利用植物基因工程的方法将烟草花叶病毒外壳蛋白基因(CP基因)导入烟草并在转化的烟草植株中表达,使其获得对烟草花叶病毒的抗性.如图是转化烟草植株的培育流程,请回答:

(1)含有CP基因的cDNA文库是通过将TMV的RNA进行___获得的.在对cDNA进行PCR扩增时,设计的引物自身不能含有___序列.

(2)将CP基因导入土壤农杆菌质粒的___,其原因是___.

(3)含重组质粒的土壤农杆菌与烟草叶共培养前,对烟草叶的处理要求是___.

(4)共培养形成愈伤组织时的培养条件是必须___有光或避光).

(5)在配置诱导芽、根的培养基时,要注意在不同的培养阶段需调整___的比例.最终检测转基因是否成功,可用___方法进行检测.

迟志先回答:
  (1)以RNA为模板合成DNA的过程为逆转录过程,故含有CP基因的cDNA文库是通过将TMV的RNA进行反转录获得的.在对cDNA进行PCR扩增时,设计的引物自身不能含有互补序列,否则两引物会互补配对形成双链.   (2)由于土壤农杆菌T-DNA可以从农杆菌中转移并稳定整合到植物染色体的DNA中,故将目的基因CP基因导入土壤农杆菌质粒的T-DNA区.   (3)含重组质粒的土壤农杆菌与烟草叶共培养前,对烟草叶的处理要求是无菌,并切成小片.   (4)共培养形成愈伤组织时的培养条件是必须避光,形成叶绿体时则需要光照.   (5)生长素与细胞分裂素比值较高时有利于生根,较低时有利于生芽,在配置诱导芽、根的培养基时,要注意在不同的培养阶段需调整生长素和细胞分裂素的比例.最终检测转基因是否成功,可用抗原-抗体杂交方法进行检测形成的蛋白质.   故答案为:   (1)反转录  互补   (2)T-DNA区   T-DNA可以从农杆菌中转移并稳定整合到植物染色体的DNA中   (3)无菌,并切成小片   (4)避光   (5)生长素和细胞分裂素     抗原-抗体杂交(或抗病接种实验)
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