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关于PCR溶液体系的配制每个PCR反应包括25ng模板DNA,0.5μmol/L正反向引物,0.2mmol/LdNTPmix,0.5个单位的TaqDNA聚合酶和1×PCRbuffer(Fermentas),反应体系为10μl.请问每个试剂应该去多少,buffer试剂是10
更新时间:2024-05-10 09:36:25
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问题描述:

关于PCR溶液体系的配制

每个PCR反应包括25ng模板DNA,0.5μmol/L正反向引物,0.2mmol/LdNTPmix,0.5个单位的TaqDNA聚合酶和1×PCRbuffer(Fermentas),反应体系为10μl.请问每个试剂应该去多少,buffer试剂是10的.

郭君红回答:
  加入量和浓度有关,只要知道每一个要加入物质的浓度就可以算出来了:   模板的体积=25ng/模板的浓度(这个值需要测定,如果实在不知道模板浓度,就加0.1-0.5ul左右吧)   引物的体积=0.5umol/1000uL*10uL/引物浓度(根据自己配制的情况,有时候可能是100mM或者是200mM)   Taq酶体积=0.5U/Taq酶活力单位浓度(标注在管子上,U/uL表示的数字)   Buffer的量应该是1uL.(这里需要解释一下,经过确认,没有1X的buffer,因为如果是1X的话,没法加了,所以正确的应该是10X的buffer,加入量就是稀释10倍,所以10uL体系加1uLbuffer)
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